Genética Curiosa: TECNOLOGÍA DEL DNA RECOMBINANTE

En esta entrada voy a hablaros sobre las técnicas usadas en ingeniería genética para manipular el genoma de un organismo.

Este conjunto de técnicas, conocido como tecnología del DNA recombinante, comenzó a desarrollarse a partir de la década de 1970 y permitió investigar la estructura y función de los genes, en especial, de los genes de eucariotas.

Herramientas utilizadas en ingeniería genética

Los biólogos moleculares necesitan de una gran variedad de enzimas (polimerasas, enzimas de restricción, ligasas, etc.) que les permiten manipular los ácidos nucleicos. También es necesario el uso vectores que permiten introducir el DNA de interés en las células hospedadoras donde se realiza la replicación.

Técnicas para manipular los ácidos nucleicos

Hibridación de ácidos nucleicos

Permite localizar fragmentos concretos de DNA o mRNA en el genoma de un organismo.

Primero se desnaturaliza el DNA, es decir, se somete a una alta temperatura o a un pH alto para romper los puentes de hidrógeno que mantienen unidas las dos cadenas complementarias de DNA.

Después se mezclan los DNA desnaturalizados de dos muestras distintas que se hibridan al azar por complementariedad de bases.

Secuenciación del DNA

Hoy es posible secuenciar el genoma de un organismo pero para ello necesitamos analizar porciones pequeñas y luego integrar los resultados. Para obtener pequeñas secciones de DNA se utilizan enzimas de restricción que posteriormente se separarán mediante electroforensis en gel. Estos fragmentos se pueden ensamblar para definir la secuencia completa de la molécula del DNA.

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

Es un método que permite, a partir de una muestra muy pequeña de DNA, obtener millones de copias idénticas, en pocas horas y sin necesidad de usar células vivas. Se requiere sintetizar dos cebadores al comienzo y al final de la secuencia. La muestra de DNA se coloca en una solución que contiene DNA polimerasa, los cuatro nucleótidos en cantidad y los cebadores mencionados.